PART 2 质粒提取的目的是什么？

基因操作：获取携带目标基因的质粒，用于转化、转染或体外编辑。

扩增与保存：纯化出高纯度质粒用于长期保存或后续实验（如PCR、测序、酶切）。

功能验证：通过质粒表达验证基因功能（如荧光蛋白标记、蛋白表达分析）。

PART 3 质粒提取流程 & 避坑指南

(1)硅胶膜吸附条件

a.确保结合缓冲液（高盐）与上清充分混合，促进质粒结合至膜上。若溶液浑浊，可静置1～2min后再离心。

b.避免超过离心柱载量（通常≤20μg DNA），大质粒（>10kb）需更温和操作。

(2)洗涤去杂质

使用洗涤液（含乙醇）彻底去除盐分和蛋白质，离心后弃去滤液，空柱再短暂高速离心后，需进行5～10min的干燥处理，使乙醇彻底挥发。残留乙醇会抑制后续酶反应。

(1)洗脱效率优化

a.使用预热（60℃）的EB缓冲液或ddH₂O，pH≥8.0。将洗脱液滴加至膜中央，静置2～5min后再离心。

b.洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要提高质粒浓度，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小会降低质粒洗脱效率，减少质粒产量（最小应不少于30μl）。

(2)保存条件

短期保存于4℃，长期存于-20℃。避免反复冻融（分装保存）。

取3ml菌液，按照PK01说明书分别提取大小为2kb、3kb、4kb、6kb不同质粒，用60μl洗脱液进行洗脱，得到的质粒用琼脂糖凝胶电泳进行验证。结果显示，本试剂盒针对不同大小的质粒均具有较好的提取效果。