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高保真酶扩增总出问题？一文搞定扩增失败、突变率高、条带异常！
发布时间：
2025-05-21
高保真酶因其高扩增效率和低错误率，成为PCR的“黄金工具”。
但在实际实验中，你是否遇到过扩增无条带、出现非特异性条带、长片段扩增效率低甚至完全无产物等问题？
壹
扩增无条带
贰
非特异性
条带
叁
长片段
扩增效率低
本文总结了
高频问题及解决方案
助你轻松突破瓶颈
1
扩增无条带
可能原因
1.模板降解或抑制剂残留
2.引物设计不佳
3.酶活性未充分激活（需热启动）
解决方案
✅推荐使用优基生物“琼脂糖凝胶回收试剂盒GeniusPure Agarose-Gel Recovery Kit（Code：GK01）”纯化模板，避免抑制剂干扰。
✅建议重新设计引物并进行预实验扩增。
✅优基生物GeniuSTAR系列高保真酶需95℃预变性3min激活（漏掉这一步效率降50%！）。
2
扩增有非特异性条带（杂带）
可能原因
1.引物浓度过高
2.镁离子（Mg²⁺）浓度不适配
3.循环数过多
解决方案
✅ 降低引物浓度（建议终浓度0.2μM）。
✅ 调整Mg²⁺浓度（高保真酶对Mg²⁺敏感，可尝试1.5-3mM梯度优化）。
✅ 减少循环数（一般设置25-30循环就足够）。
3
长片段扩增效率低
关键因素
普通高保真酶持续合成能力不足
解决方案
推荐使用优基生物高保真酶“含染料预混型高速长链高保真PCR酶2X GeniuSTAR HiFi Fast PCR Master Mix(Dye plus)（Code：P0017）”，该酶可稳定扩增长片段>10kb，且扩增速度可达5sec/kb，显著提升实验效率！
4
克隆后测序突变率高
可能原因
1.使用的聚合酶保真度低
2.反应参数不合理：循环次数过多；退火温度不合适
解决方案
✅选择具有高保真性的聚合酶，如Pfu聚合酶、超保真Taq酶等，可有效降低扩增过程中的突变率。推荐使用优基生物GeniusSTAR系列高保真酶。
预混型高速高产量高保真PCR酶（P0016）
每10万碱基扩增变异率低于3个位点
含染料预混型高速长链高保真PCR酶（P0017）
每10万碱基扩增变异率低于6个位点
✅酶应避免反复冻融，可将酶小份分装使用。
✅优化反应参数：根据模板和引物的特性，合理设置PCR的反应参数（退火温度、延伸时间和循环次数等），减少错误累积。
好物推荐：GeniusSTAR系列高保真酶
高保
真度
快速
扩增
扩增特
异性强
使用
便捷
Q包装可以免费申请试用哦，具体活动可联系当地的优基生物业务员！
预混型高速高产量高保真PCR酶
（Code：P0016）
扩增量更大，
适用于高通量测序建库、基因克隆（TA克隆、无缝克隆）、多重PCR等。
含染料预混型高速长链高保真PCR酶
（Code：P0017）
高保真度更高，
适用于复杂模板（如GC-rich、二级结构），成功率提升90%。
关于我们
日韩一区二区在线观看视频-无码国产精品午夜福利-无码人妻欧美丰满熟妇区毛片-亚洲最近中文字幕在线-国产又色又爽又黄又免费软件（U&G Bio）成立于2020年，是一家专注于分子诊断领域，集研发、生产和销售于一身的生物科技公司。优基生物能够为客户提供样本保存-核酸提取-分子检测-体外诊断试剂为一体的整体检测方案和定制化服务，始终秉承“客户至上”的服务理念、坚持“超纯品质、卓越创新”的产品目标，不断优化产品质量。立足于杭州医药港小镇，面向全国，优基生物致力于为广大生命科学研究者、体外诊断企业及高端研究型公司提供最优质的产品及服务。
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