根据实验目的，逆转录引物可以从Oligo dT、随机引物（Random hexamers）和基因特异性引物（GSP）中进行选择。

（1）Oligo dT

Oligo dT与mRNA的Poly(A)尾巴可以发生特异性结合，因此主要用于逆转录带有Poly(A)尾巴的RNA，例如真核生物来源的mRNA。此外，一般情况下Oligo dT也是长链及全长RNA的逆转录引物的首选。

（2）随机引物（Random hexamers）

随机引物的灵活性强，因此可用于目的片段在mRNA、rRNA、tRNA等各种RNA上的逆转录。同时，针对GC含量较高、具有复杂二级结构或来源为原核生物的目的片段RNA也同样适用。

（3）基因特异性引物（GSP）

基因特异性引物是根据目标RNA的已知序列进行设计的，由于引物和RNA序列特异性结合，在使用基因特异性引物时，不能进行其他基因的检测，通常特异性引物用于一步RT-qPCR实验中。

（4）Random+Oligo dT 引物组合

Random+Oligo dT Primer组合适用于各种RNA的表达量分析，能够提升反应检测的灵敏度，更适用于荧光定量PCR前的逆转录反应。优基生物荧光定量前逆转录产品Q1004A及Q1005A中，逆转录引物均为Random+Oligo dT Primer组合。

不建议测浓度。

逆转录后的产物是一个混合体系，有cDNA、未完全逆转录的RNA、dNTPs、残余的引物以及各种蛋白和盐离子等成分，会干扰cDNA的吸光度，因此不建议用逆转录后的cDNA来检测浓度与纯度。

当cDNA产物中混有gDNA时，cDNA和gDNA在qPCR反应时会被同时扩增，无法区分荧光信号是来自于cDNA还是gDNA，因此定量结果可能会存在偏差。特别是低表达量的基因，本身的扩增信号低，Ct值大，更加容易受到gDNA污染的影响。

在逆转录的时候，加一步gDNA去除的步骤，能够有效的降低gDNA污染的影响，增加实验的可信度。

首先要保证RNA模板完整性及纯度都要高；

进行逆转录时加入适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱；

若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。